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该系统由CMA公司的动物微透析采样系统和waters公司生产的型号为Waters Xevo TQ-S质谱仪构成,其中微透析采样系统主要由微量注射泵、清醒活动装置、微透析探针及低温微量收集器组成;Waters Xevo TQ-S质谱仪由Acquity UPLC超高效液相色谱和Waters XEVO TQS质谱及Waters Masslynx质谱工作站构成。
微透析采样系统主要原理是将一种具有半透膜的探针置于实验动物的特定组织中,利用泵推送溶液至探针处,从而使组织内的目标物质通过半透膜扩散到探针内,以达到从组织内取出需要测量的低分子量物质的目的。Waters Xevo TQ-S质谱仪采用创新型StepWave离轴离子聚焦技术可提供更高的灵敏度和稳定性。在RADAR模式下,既可监测样本中的基质干扰物、代谢物、杂质和降解产物,同时又可准确对目标化合物定量。
整体、清醒、动态检测生物体的代谢变化,是体现中医药整体复杂体系研究中需要解决的关键技术。该系统在动物清醒自由活动的状态下,对动物体内的特定部位进行实时、动态取样,Xevo TQ-S质谱仪实时分析生物体内特定部位内源性物质或外源性物质,完成目标分析物的动态监测,研究药物在体内的分布以及药物对不同器官生物学指标的影响,可实现药物药代动力学和药效动力学的同体、同步研究,对于揭示中药的作用机理提供了有效的方法。
应用范围
1.神经递质检测
主要包括单胺类、氨基酸类、嘌呤类、乙酰胆碱、皮质醇、睾酮等内源性神经递质检测。通过微透析技术对动物特定部位实时在线采样,获得基本不含蛋白质、酶等大分子物质,可不经预处理的透析液样品,检测活体组织中各类神经递质,研究多重神经递质系统间的交互作用以及复杂的神经环路,为神经变性和精神性疾病机制研究提供依据。
图1 标准品和样品溶液中单胺类、氨基酸类、嘌呤、皮质醇神经递质MRM色谱图
图2 药物不同剂量给药后mPFC 脑区透析液中多巴胺含量变化
2.药物代谢和药动学研究
对获得透析液样品中药物成分进行检测,可连续跟踪体内多种化合物浓度随时间的动态变化,其良好的时间分辨性,可使药代动力学资料更准确,对于研究中药复方在体内的吸收、代谢、分布提供详细的资料。
图3 不同成分MRM色谱图
图4 药物不同剂量给药后在mPFC和NAC内药代动力学变化