发布时间:2024-11-17 浏览人数:1010
在生物实验体系中,基因表达的差异一直是研究的重点领域;同时随着现代研究的深入,以循环肿瘤DNA(ctDNA)、病毒DNA/RNA等体内极低丰度基因为检测目标的痕量基因检测也形成了热点领域。免疫学实验室以核酸定量分析技术的革新级设备——微滴式数字PCR为核心,辅以Real-time PCR、全自动核酸提取仪及其它相关设备,打造了一整套核酸基因样品制备——基因差异检测——痕量基因分析实验体系。
1.微滴式数字PCR实验
Bio-Rad QX200微滴式数字PCR系统与普通PCR技术(第一代)、real-time PCR技术(第二代)相比,数字PCR被称为具有更高精确度、准确性和灵敏度的第三代PCR技术。该技术定量的结果不依赖Cq值,而是直接给出靶序列的起始拷贝数浓度,实现真正意义上的绝对定量。
微滴式数字PCR系统是Bio-Rad开发的具有领先地位的数字PCR设备。该设备可将含有核酸分子的荧光PCR反应体系分割成数万个纳升级微滴,每个微滴独立反应。扩增完毕后逐个对每个微滴进行荧光信号检测,将荧光模拟信号数字化。其主要应用领域包括基因表达差异研究、基因组学及表观遗传学的研究、第三方医学检测、病原微生物检测、环境监测、食品安全及转基因成分的检测、NGS 测序等。
2.实时荧光定量PCR实验
实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术是具有里程碑意义的技术,它实现了PCR从定性到定量的飞跃。免疫学实验室的CFX Connect™具有(1)功能全面:系统具有创新光学设计及强大的数据分析软件,能满足所有荧光定量 PCR 需求;(2)双目标多路测定:可区分单个反应孔中的两个目标,同时进行两个目标基因的分析;(3)快速热循环:完善的热循环系统,缩短从设置到结果的时间,实验方案自动编写,温度梯度优化,快速升降温使达到 PCR所需时间达到最短;(4)快速扫描:比其它仪器更快地完成 SYBR® Green I 和单色 FAM 扫描,从所有 96 个孔读取单通道荧光只需 3 秒钟;(5)可操作荧光共振能量转移 (FRET):系统的光学快门包括一个含有 LED 滤波光电二极管组合的通道,专用于 FRET 单链体试验等技术优势,是免疫学实验室基因差异检测定量分析体系中重要的组成部分,可被用于数字PCR系统的条件探索及初筛分析。
3.全自动核酸提取实验
Qiagen公司开发的QIAcube全自动核酸提取仪可以解决数字PCR、real-time PCR的核酸样品制备工艺问题。全自动的核酸纯化步骤不仅将研究人员从单调重复的劳动中解放出来,还能最大程度保证样本的产量、完整性,减少批间误差,增加实验的可重复性。其主要功能和优点为:(1)快速高效:提取过程高效,12个样品可在45分钟内提取完毕,保证样品在最新鲜的状态下,短时间内提取出核酸;(2)高质量产物:获得的核酸的一致性和重复性极佳,核酸纯度达到二代测序、SNP、芯片等要求,对于痕量样本可以达到核酸提取最大化;(3)自动化:完全自动化操作而简化了样本的纯化过程,每轮可操作多达12 个样本;(4)广泛适用性:纯化程序可拓展,适用于各种样本和试剂盒;可从多种来源的样本中自动化纯化DNA、RNA甚至蛋白质;(5)操作简便:内置离心与振荡/加热模块,由机械臂实现样本转移;内置触摸屏控制,无需外接电脑,节省空间。