原代细胞的提取、培养与鉴定功能单元
发布时间：2024-11-17 浏览人数：1007
原代细胞的提取、培养、鉴定实验原理主要涉及将组织离散成单个细胞，然后在合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，进一步对培养的细胞进行特征性鉴定，确定细胞的类型和纯度。这一过程需要严格的无菌操作环境，以确保细胞的健康生长。原代细胞的分离、培养与鉴定应用广泛，可用于研究细胞生物学、细胞功能、细胞信号传导、细胞分化、细胞增殖等方面的研究，还可以用于药物筛选、毒性测试、疾病模型构建等研究领域。涉及实验如下：
1. 原代细胞提取实验
从动物或人体中取出需要研究的组织或器官，并进行适当的处理，如切碎、胰蛋白酶等消化、过滤等，使用密度梯度离心法或原代细胞分离仪进行原代细胞提取或同时使用流式细胞仪等进行细胞分选，以最终获得单个细胞的悬浮液。本室使用Sigma3-18KS低温离心机、德国美天旎GentleMACS八通道全自动组织解离器进行提取或联合免疫室BD公司流式细胞分选仪进行分选。细胞提取要求需根据具体细胞分类确定。
2. 原代细胞培养实验
将分离得到的细胞置于合适的培养基中，模拟体内生理条件以促进细胞的生长和增殖。在人工控制的环境下，如控制温度、湿度、CO2浓度等利于细胞生存、生长和繁殖。细胞培养技术的优点包括可以直接观察活细胞，在控制的环境条件下进行实验，避免体内实验的复杂因素，同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，具有经济高效的优点。本室使用Thermo 371二氧化碳培养箱进行原代细胞培养。
3. 原代细胞鉴定实验
通过倒置相差显微镜等仪器观察细胞的形态和生长情况，以及通过特定的实验试剂和条件测试，如形态学观察、免疫细胞化学染色、免疫细胞荧光染色、细胞表面标记物检测等方法，对培养的细胞进行标志性特征鉴定，确定细胞的类型和纯度。本室使用OLYMPUS倒置相差显微镜或OLYMPUS BX63全电荧光显微镜进行鉴定。
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